Molecular methods in the diagnosis of HSV stromal keratitis

Abstract

Роговичната стромална лезия може да има обширна диференциална диагноза. Серологичното изследване често не е достатъчно категорично по отношение на етиологията. Прилагането на полимеразна верижна реакция (PCR) при диагностични затруднения е ценен метод за доказване на евентуалния причинител – херпетичния вирус.
Цел: Да установим ефективни ли са молекулярно-вирусологичните техники и в частност полимеразната верижна реакция (PCR) в диагнозата на стромалния херпетичен кератит.
Материал и методи: Рандомизирано, проспективно проучване, включващо 9 пациенти (9 очи, 6-ма мъже и 3 жени, средна възраст 49,6 г.) с предполагаем стромален херпес симплекс вирусен (HSV) кератит. Пациентите са лекувани амбулаторно и се разделят в две групи: Група 1
– с типични стромални херпетични лезии (7 очи) и Група 2 – с атипични клинични белези (2 очи). За извършването на PCR реакцията се ползва HSV 430/720 V-8-50R Amplification Kit (Saccace Biotechnologies, Italy). Ползвани бяха положителни и отрицателни контроли.
Резултати: При очите с типична клинична картина (Група 1) вирусен генетичен материал доказахме в проба от сълза, взета с микропипета при 2/7 случаи (28,6%) и 1/7 случаи (14,3%) в проба от сълза, получена чрез Schirmer-тест лента. При двете очи с нетипична стромална лезия
(Група 2) установихме причинителя при 1 от 2-та случая (50%) с хартиена Schirmer -тест лента и микропипета. При този пациент диагнозата бе потвърдена и чрез епително абразио (дебрайдмънт), възможно, поради съпътстващата, надлежаща епителна лезия. Заключение: Полимеразната верижна реакция (PCR) е надежден метод за доказване на диагнозата херпетичен стромален кератит, лимитиращ фактор за ефективността £ е методът на събиране на пробите.

Абревиатури в текста: Полимеразна верижна реакция (PCR), херпес симплекс вирус (HSV), дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК), интервал на достоверност (CI), варицела-зостер вирус (VZV), цитомегаловирус (CMV).

A corneal stromal lesion could have quite an extensive differential diagnosis. One of the main agent causing corneal inflammation is the herpes simplex virus (HSV). Serology investigation often isn’t eloquent enough concerning the etiology of the disease. Applying polymerase chain reaction (PCR) when in doubt is a valuable method for proving the causing
agent – in that case the herpetic virus.
Purpose: To evaluate the effectiveness of molecular-virology techniques – PCR in the diagnosis of HSV stromal keratitis.
Material and Methods: Randomized, prospective study, including 9 patients (9 eyes), of which 6 men and 3 women, average age 49,6 years with diagnosis to proof – HSV stromal keratitis. The patients were treated on an outpatient basis and were divided into 2 groups: Group 1 – with typical stromal herpetic lesions (7 eyes) and Group 2 – with atypical stromal
presentation (2 eyes). For performing the PCR we used HSV 430/720 V-8-50R Amplification Kit (Saccace Biotechnologies, Italy). Positive and negative controls were used.
Results: In eyes with typical presentation (Group 1) we proved specific viral DNA in tear film sample, collected with micropipette in 2 out of 7 eyes (28,6%) and in 1 out of 7 (14,3%), collected with Schirmer-test strips. In Group 2 we found herpetic DNA in 1 out of 2 eyes (50%) with Schirmer-test strip and micropipette. In that particular patient the diagnosis was confirmed using epithelial debridement, which we had the opportunity to perform due to an overlying epithelial lesion.
Conclusion: Polymerase chain reaction (PCR) is a reliable method for stating the diagnosis of herpetic stromal keratitis and a possible limiting factor could be the way of collecting the tear film or epithelial cell samples.

Abbreviations in text: Polymerase chain reaction (PCR), Herpes simplex virus (HSV), Deoxyribonucleic acid (DNA), Confidence interval (CI), Varicella zoster virus (VZV), Cytomegalovirus (CMV).